一、如何选择优质的elisa试剂盒
这种答案千篇一律
我们是试剂供应商。
Q丨2丨4丨8丨3丨7丨3丨3丨8丨6丨6丨
0利润供应elisa试剂盒
二、ELISA酶联免疫吸附实验分析讨论
关于这个有具体文献的，建议楼主用于参考下，要是有什么elisa试剂盒方面的问题，也可以私信我具体解析
三、做elisa实验需要注意哪些问题？
Elisa实验中应该注意的问题，包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题，希望对你有用处。
Elisa试剂盒有着准确性高、灵敏度高、特异性强的诸多优点，深受广大用户朋友的喜爱。然而，在实验过程中，也需要注意很多问题。对此，武汉福来生物工程提醒你，需要遵守一些规则，才能更好地进行实验，取得较好的实验成果。
Elisa方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。在Elisa测定中影响因素较多，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：标本因素；试剂因素；操作因素。
1．样品稀释
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。
2．试剂盒平衡
Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃)，一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3．样品和试剂的混匀
在稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。
4．加样
加样是一项很重要的步骤。加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。
5．温育
温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
6．洗板
固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。
7．显色
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说，显色时间过短，结果偏低；显色时间过长，空白增高或者非特异性显色增加。
8．比色
比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。
四、elisa过程中有哪些注意事项？
ELISA实验通用规则
1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但最好有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。
10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
12、底物是光敏感的，要在临用前现配。
13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清，否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
二、下面所提到的是针对我公司的ELISA产品会出现的问题及解决办法
1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因：未加入酶标记物。
解决办法：请按照操作步骤进行。
b.原因：试剂盒内容物未能充分回。
解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因：室温太低。
解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。
d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因：试剂盒已过有效期限。
解决办法：请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。
a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
b.原因：操作时间拖太久。
解决办法：请在方法熟练后再进行操作。
c.原因：微孔间相互污染。
解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。
d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。
e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。
f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。
3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因：室温太高(>25℃)。
解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因：底物溶液受到污染。
解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。
c.原因：反应时间超过太久。
解决办法：请控制反应时间。
d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)
4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。
解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.)。
解决办法：请参考2-f.
c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法： 请参考2-d.
|
